酶解后?nanodrop對肽段定量，取1μg肽段溶液上機檢測。
高pH反相?譜根據(jù)肽段的理化性質(zhì)不同，通過調(diào)節(jié)流動相的極性來完成對復雜多肽樣本的分離。將?個樣本分離成多個餾分，分別上機檢測，能夠有效的提?鑒定深度，提?鑒定蛋?鑒定數(shù)量。
看SDS-PAGE電泳圖條帶豐富，分布基本均勻，清晰，蛋??量充足。同組生物重復樣本，條帶基本?致，沒有降解，如果有高豐度條帶，需要進?特殊處理。
實驗?法原因：電泳壓力太大；緩沖液配制時間過?；上樣前樣品加熱不充分；
樣本原因：樣本鹽濃度太?；樣本上樣量太?；樣本溶解不完全；樣本有降解。
①樣本收集過程中處理不當，如樣本收集操作時間較長，沒有在冰上操作。蛋?酶處于活性狀態(tài)，未加?變性劑或蛋?酶抑制劑。
②引入了較多雜質(zhì)，如發(fā)酵液引入；植物根葉清洗后沒有吸收多余的水分，處理過程溫度較?等。
③樣本反復凍融。
部分樣本（?的?液）可以通過去除?豐富蛋?的試劑盒Proteominer去除，通過標準SDS-PAGE驗證去除效果；還可以通過跑膠檢測，切除?豐度條帶。但可能會濾掉部分的低豐度蛋?。我們公司?般采?與樣本相對應的試劑盒來去除?豐度蛋白。
含有?豐度蛋?樣本：血液（?蛋?）、唾液（淀粉酶）、腦脊髓液（白蛋?）、卵泡液（?蛋?）、肌肉組織（肌蛋?）等通常情況下，由于質(zhì)譜shotgun采集原理，?豐度蛋?會影響低豐度蛋白的檢出，導致最終鑒定出來的蛋?數(shù)?（尤其是低豐度蛋白）偏少。?般情況為了還原樣本的原始情況，我們不建議去除高豐度 ，而是選擇非標定量?法進行分餾分上機。
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